Diabetologia：激活但功能受损的清醒Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现肝细胞自身抗原到经常出现1DF肾病医学病征的重大突破率在孩童中期就有很好的刻画，多个肝细胞自身抗原中性的孩童中会有70%在血清转换后10天内患上肾病，而随访15年的孩童这一数量增大到84%。来得之下，占到医学1DF肾病一半以上的DF1DF肾病的发病必要还没有取得充分的研究者。

更加多的人开始运用于分期的系统来假定1DF肾病的重大突破：个本体在经常出现多种肝细胞自身抗原时踏入第1期中，经常出现食欲异常时踏入第2期中，经常出现病征时踏入第3期中。一些多发肝细胞自身抗原中性的个本体，在1期和2期，重大突破更慢，并蓬勃发展为发病的1DF肾病。我们以后刻画了一组在首次筛选到多种肝细胞自身抗原样品后至少10年无肾病的更更慢重大突破者，这组病症数量少，但特质非常一致。随后，我们见到肝细胞自身抗原专一性CD8+T蛋白质化学反应在重大突破很更慢的病症中会基本不存在，但在近期发病和长期存在的肾病病症中会很容易筛选到。这可能确实，与重大突破病症来得，这些病症自身免疫化学反应的调节增强。

20世纪研究者确实，尽管调节性T蛋白质(Treg)数量经常性，但肾病病症存在一些特性缺失，其中会包括对IL-2的化学反应技能减少。此外，肾病病症中会的畸变CD4+T蛋白质可能对调节更具抵抗性，观感为畸变T蛋白质的选择性逼近，自然产生的Treg和本体外产生的抑止Treg，以及抗原经历的CD4+T蛋白质中会IL-2化学反应逼近。本研究者的目标是刻画了CD4+调节性T蛋白质(Treg)在领头极很更慢重大突破者中会的特质，他们的平均年岁为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

工具：BOX研究者是一项以年轻人为基础的纵向研究者，在21岁以下确诊的病症亲族中会检查1DF肾病的危险各种因素。我们以后刻画了长期很更慢重大突破者的特质，他们依然多重肝细胞自身抗原中性至少10年，但没有经常出现肾病的医学病征，更慢性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名继续依然无肾病并想提供大量本体液样品的很更慢重大突破者纳入T和B蛋白质特性深入研究。在目前的研究者中会，8名更慢重大突破者(SP组)，中会位年岁43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的肝细胞自身抗原中性。所有的参加者都东南面1DF肾病重大突破的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身抗原对某些抗原的中性化学反应，然而，一名病症以后东南面2期至少6年，但没有经常出现医学病征，一名病症被诊断为肾病，该受试者72岁，在采自实验样品时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究中会对该诱导顺利完成了单独评估。分开外周血单个核分裂蛋白质(PBMCs)，采用多实例流式蛋白质妖术和T蛋白质选择性试制评估诱导中会Treg的频可知、表DF和特性。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利完成无行政官员聚类深入研究，评估Treg表DF。

结果：与身本体健康诱导来得，来自更慢重大突破本体的无意识CD4+T蛋白质的行政官员聚类揭示，酪氨酸的无意识CD4+ Treg频可知增大，与糖皮质激素抑止的TNFR相关蛋白(GITR)表示增大有关。一名HbA1c消退的病症与重大突破很更慢者和匹配的样品来得，Treg可知有所并不相同。特性深入研究确实，与身本体健康诱导来得，来自很更慢重大突破本体的Treg介导的CD4+畸变T蛋白质选择性明显毁损。观感为对畸变CD4+T蛋白质CD25和CD134表示的选择性增大。

绘出1 深入的表DF深入研究揭示，CD4+Treg亚DF在更慢重大突破数据流中会增大。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有诱导的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据记号物表示鉴定出10个元簇:无意识T蛋白质_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T蛋白质;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白质;新线程Treg_1;新线程Treg_2;新线程Treg_3;和新线程Treg_4。(a)运用于9个并不相同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个键值代表一个空降兵(100个空降兵)，非常大的元空降兵(10个元空降兵)在键值组一处手绘。每个键值中会的饼绘出问到单个记号的表示级别。(b)每个元聚类的热绘出，以揭示整本体记号表示。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)生成绘出，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下轻元素为每个metacluster箱新线绘出(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP组:新线程Treg_2 (e),新线程Treg_3 (f),新线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T蛋白质(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T蛋白质(l)。紫色带子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩筛选。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 运用于CITRUS的预测模DF证实，Treg频可知的增大是重大突破很更慢的字样。级别门控(a - f)和柑橘深入研究(g-k)更为SP参加者和匹配的HD参加者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的相似之处。(a)流感病毒CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个本体的代表性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富含，然后通过HLA-DR和GITR表示顺利完成分开，模拟FlowSOM个本体。(b) HD(黑斑)和SP(蓝点)组以及诱导SP 606(紫色)中会CD25+ cd127的频可知摘要绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的箱新线绘出;(c) HLA-DRloGITR−(新线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(新线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(新线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+新线程T cell)。(g - i)经济作物簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表示强度着色，上标突出的簇被识别为SP和HD数据流彼此之间的并不相同。(j)箱新线绘出揭示了在SP(蓝点)和HD(灰点)组中会，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相比之下轻元素(数量)。(k)直方绘出揭示每个簇的表DF(深蓝色)和Treg记号相比之下表示与时代背景表示(紫色);上列，新线程Treg_3;后面一行，新线程Treg_4。时代背景与所有其他簇中会记号的表示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩筛选

绘出3 与身本体健康献血者来得，重大突破很更慢者无意识treg的GITR增大。每个无意识CD4+T蛋白质元簇(无意识T蛋白质_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T蛋白质;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白质;新线程Treg_2;新线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)筛选每个表示记号的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的表示热绘出(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR表示串联，揭示直方绘出(c)和摘要绘出(d)。Wilcoxon筛选符号秩和筛选，p< 0.07(紫色)所有诱导包括，p< 0.05(紫色)诱导SP 606和匹配的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR表示，从级别门控，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(紫色)串联，揭示直方绘出(e)和摘要绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选符号秩筛选

绘出4 来自很更慢重大突破的CD4+ treg蛋白质控制畸变CD4+T蛋白质的技能减少。SP组用紫色的新线和带子问到，HD组用紫色的新线和带子问到，紫色的新线/带子问到诱导sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质顺利完成分选。CD4+CD25−(；也者)被记号为CFSE, Treg按捕捉到的数量滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸蛋白质，养成3当晚顺利完成流式蛋白质妖术筛选。(a-d)与CD4+；也者相比之下应的treg养成(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者养成。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE选择性多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性多于。运用于中性印证(酪氨酸的响应蛋白质内含treg)算出选择性多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

绘出5 畸变CD4+T蛋白质对很更慢重大突破的T蛋白质酪氨酸的选择性更引人注意。SP组用紫色的新线和带子问到，HD组用紫色的新线和带子问到，紫色的新线/带子问到诱导sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质顺利完成分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel记号，treg按捕捉到的数量滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸蛋白质，养成3当晚顺利完成流式蛋白质妖术(CD25反染)和蛋白质因子深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同养成。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE选择性调升(b)。(c,d) CD25选择性调升(c)和CD134选择性调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成中会的表示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

结论：我们得出的结论是，来自很更慢重大突破子的酪氨酸无意识CD4+Treg在GITR表示中会取得了扩展和多样，强调了进一步研究者Treg在1DF肾病风险个本体中会的关联性的合理性。

原文应是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28