Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1同型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失去甲自身血液到消失1改进型肾病针灸副作用的重大突破率在成人时期就有不错的描述，多个去甲自身血液感染性的成人中的有70%在血液转成后10周内患上肾病，而随访15年的成人这一%减少到84%。比起之下，占去针灸1改进型肾病一半以上的改进型1改进型肾病的患病机制还没有给予合理的研究工作。

越来越多的人开始运用于分期系统来定义1改进型肾病的重大突破：性状在消失多种去甲自身血液时进入第1下一阶段，消失血糖亦然其时进入第2下一阶段，消失副作用时进入第3下一阶段。一些多发去甲自身血液感染性的性状，在1期和2期，重大突破较慢，并发展为患病的1改进型肾病。我们之前描述了一三组在首次探测到多种去甲自身血液抽样后至不及10年无肾病的亦然慢重大突破者，这三组病症次数不及，但基本特征非常明确。随后，我们发现去甲自身特异性特异性CD8+T蛋白质反其所在重大突破很慢的病症中的基本不共存，但在近期患病和起因于的肾病病症中的很容易探测到。这可能表明，与重大突破病症比起，这些病症性疾病反其所的调节增强。

早期研究工作表明，尽管调节性T蛋白质(Treg)总数长等待时间，但肾病病症共存一些功用毛病，其中的包含对IL-2的反其所能力减少。此外，肾病病症中的的效其所CD4+T蛋白质可能对调节更具抵抗性，发挥为效其所T蛋白质的诱导消退，自然产生的Treg和胃产生的诱导Treg，以及特异性经历的CD4+T蛋白质中的IL-2反其所消退。本研究工作的目的是描述了CD4+调节性T蛋白质(Treg)在一小群亦然很慢重大突破者中的的基本特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访等待时间为18-32年。

新方法：BOX研究工作是一项以年轻人为了将的纵向研究工作，在21岁表列出确诊的病症亲属中的检查1改进型肾病的脆弱因素。我们之前描述了近十年很慢重大突破者的基本特征，他们保证多重去甲自身血液感染性超过10年，但没有消失肾病的针灸副作用，慢性或非来进行性性疾病。随后，10名继续保证无肾病并愿意提供大量血液抽样的很慢重大突破者归属于T和B蛋白质功用分析。在目前的研究工作中的，8名慢重大突破者(SP三组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的去甲自身血液感染性。所有的发起者都位处1改进型肾病重大突破的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身血液对某些特异性的感染性反其所，然而，一名病症已经位处2期至不及6年，但没有消失针灸副作用，一名病症被诊断为肾病，该受试者72岁，在采集实验抽样时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中的对该供形体来进行了之外评估。分离外周血单个氘蛋白质(PBMCs)，采用多参数流式蛋白质忍术和T蛋白质诱导试验评估供形体中的Treg的频率、表改进型和功用。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和回归)来进行无监督聚类分析，评估Treg表改进型。

结果：与肥胖供形体比起，来自慢重大突破形体的遗忘CD4+T蛋白质的监督聚类标示单单，介导的遗忘CD4+ Treg频率减少，与利尿剂诱导的TNFR特别蛋白质(GITR)隐含减少有关。一名HbA1c增大的病症与重大突破很慢者和最简单的对照三组比起，Treg谱有所不尽相同。功用最近，与肥胖供形体比起，来自很慢重大突破形体的Treg介导的CD4+效其所T蛋白质诱导明显受损。发挥为对效其所CD4+T蛋白质CD25和CD134隐含的诱导减少。

由此可知1 深入的表改进型分析标示单单，CD4+Treg亚改进型在慢重大突破队列中的减少。由FlowSOM降解的Treg室，聚集在来自所有供形体的能活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据标明物隐含比对单单10个元簇:遗忘T蛋白质_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T蛋白质;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)运用于9个不尽相同Treg标明降解的10个元簇的MST。每个节点代表一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在节点三组周围手工。每个节点中的的糕点由此可知表示单个标明的隐含级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以标示单单连续性标明隐含。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)降解由此可知，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说重元素为每个metacluster筒线由此可知(重元素> 0.05%)考虑到为HD和SP三组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T蛋白质(l)。粉红色边框代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 运用于CITRUS的预测模改进型断定，Treg频率的减少是重大突破很慢的徽标。分级奈斯(a - f)和棉花分析(g-k)比较SP发起者和最简单的HD发起者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差别。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的代表性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3氟化物，然后通过HLA-DR和GITR隐含来进行分离，模拟FlowSOM群形体。(b) HD(黑点)和SP(布氏)三组以及供形体SP 606(粉红色)中的CD25+ cd127的频率概述由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯子集的筒线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，交叉值得注意的簇被识别为SP和HD队列彼此间的不尽相同。(j)筒线由此可知标示单单了在SP(布氏)和HD(灰点)三组中的，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对来说重元素(%)。(k)直方由此可知标示单单每个簇的表改进型(粉红色)和Treg标明相对来说隐含与背景隐含(黄色);上列，寄存器Treg_3;下面一行，寄存器Treg_4。背景与所有其他簇中的标明的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

由此可知3 与肥胖献血者比起，重大突破很慢者遗忘treg的GITR减少。每个遗忘CD4+T蛋白质元簇(遗忘T蛋白质_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T蛋白质;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个隐含标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的隐含热由此可知(sp606不包含在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中的所有HD(红色)、所有SP(黄色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR隐含串联，标示单单直方由此可知(c)和概述由此可知(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(粉红色)所有供形体包含，p< 0.05(黄色)供形体SP 606和最简单的HD不包含在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR隐含，从分级奈斯，从所有HD(红色)、所有SP(黄色)和SP 606(粉红色)串联，标示单单直方由此可知(e)和概述由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

由此可知4 来自很慢重大突破的CD4+ treg蛋白质控制效其所CD4+T蛋白质的能力减少。SP三组用黄色的线和边框表示，HD三组用紫色的线和边框表示，粉红色的线/边框表示供形体sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质来进行分选。CD4+CD25−(其所答者)被标明为CFSE, Treg按捕捉到的%滴定。用抗CD3 /28微珠诱导蛋白质，培育出3天后来进行流式蛋白质忍术探测。(a-d)与CD4+其所答者相对来说其所的treg培育出(继发性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD其所答者培育出。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE诱导总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导总和。运用于感染性对照(介导的响其所蛋白质则有treg)量度诱导总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 效其所CD4+T蛋白质对很慢重大突破的T蛋白质诱导的诱导更敏感。SP三组用黄色的线和边框表示，HD三组用紫色的线和边框表示，粉红色的线/边框表示供形体sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质来进行分选。CD4+CD25−(其所答者)被cfsel标明，treg按捕捉到的%滴定。用抗CD3 /28微珠诱导蛋白质，培育出3天后来进行流式蛋白质忍术(CD25反染)和蛋白质因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606其所答者共同培育出。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE诱导调升(b)。(c,d) CD25诱导调升(c)和CD134诱导调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出中的的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得单单的结论是，来自很慢重大突破子的诱导遗忘CD4+Treg在GITR隐含中的给予了延展和多样，忽视了进一步研究工作Treg在1改进型肾病可能会性状中的的关联性的必要性。

注解单单处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28